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精准检测:分析型超速离心技术(AUC)表征抗体药物——AUC技术简介

点击次数:495 发布时间:2020-05-22

 

分析型超速离心技术(Analytical Ultracentrifugation,AUC)是表征生物大分子特性、研究生物分子理化性质的主要技术手段之一,用于分析样品异质性、聚集体的形成以及分子间相互作用等。瑞典科学家Theoder Svedberg在1925年发明这一技术,并于第二年制造出第一台分析型超速离心机。经过近百年的应用、验证和发展,目前这一技术已广泛应用于生物制药、生命科学及高分子科学等研究领域。

 

贝克曼推出的Optima AUC分析型超速离心机由主机、光学系统、转头以及样本池组件等构成,可以想象成是一台制备型超速离心机和光学检测系统的结合,但不同于制备型离心机,Optima AUC作为分析型仪器可以实时监测样品沉降过程中溶质浓度随时间和距离的改变,从而计算得到分子特性。

 

 

 

分析型超速离心技术的分析方法主要有沉降速率(Sedimentation Velocity)沉降平衡(Sedimentation Equilibrium)两种。

 

沉降速率是一项流体动力学技术。沉降速率实验中,样品被高速旋转,溶质分子向样品池底部移动,通过记录的数据来测定溶质分子运动的速率。运动速率用沉降系数表示,它取决于分子量、分子形状或构象。对于不同组分的样品,根据不同的沉降系数检测每个组分。

 

 

沉降平衡是一项热力学技术。沉降平衡试验在较低的转速下进行,当沉降作用与扩散作用达到平衡时测定分子平衡浓度的分布。在平衡状态下,浓度的分布只决定于质量而与分子的形状无关。离心开始时,分子颗粒发生沉降,一段时间以后,沉降的结果造成了浓度梯度,因而产生了蛋白质分子反向扩散运动,当反向扩散与离心沉降达到平衡时,浓度分布固定不变。

 

 

扫描得到沉降数据后,通过后续软件分析可得到样品表征结果,目前普遍应用SEDFIT/SEDPHAT分析软件。下图为沉降速率数据分析拟合后得到的c(S)分布图,根据分析结果可精准检测生物大分子聚集状态以及聚集体准确百分比含量。

 

 

揭开了AUC的神秘面纱,我们已经了解到分析超速离心技术在蛋白药物聚集体检测方面有其独特优势,不需要标准品与标记物,直接检测最终溶液中样品状态,更接近蛋白质真实生理状态等。

 

AUC在表征抗体药物特性时有如下多方面应用,具体应用实例介绍请关注下期内容!

 

●  精准检测抗体药物聚集体

●  抗体药物制剂筛选

●  表征抗体偶联药物结合效率

●  抗原——抗体相互作用检测

●  批次一致性检测

 

 

* 以上涉及到所有产品仅用于科研和工业,不用于临床诊断。

 

 

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