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细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

点击次数:241 更新时间:2024-05-24

上一篇《细胞计数仪知识分享系列 I 性能检测篇》中,我们发现全自动细胞计数仪在检测细胞样品的重复性和梯度稀释的结果准确性上,都比半自动插板式细胞计数仪更有优势。那么大家可能会问:

细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

导致这样的性能差异原因是什么?

细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

目前市场上许多公司都自诩所卖的细胞计数仪是全自动的,那我们又如何区分哪个是全自动,哪个是半自动?

本文我们将给大家介绍下全自动和

半自动细胞计数仪性能差异的原因

以及如何快速地鉴别全/半自动细胞计数仪

PART 01


全自动和半自动

细胞计数仪性能差异的原因


首先,我们对台盼蓝染色的图像法细胞计数仪的检测过程做下回顾,下面6个步骤是细胞计数和活率分析的基本流程。




细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

传统显微镜下手工细胞计数(如下所示),前面5步操作都要操作人员来手动完成。因为人为操作带来的误差不可避免,导致结果差异有时会很大,甚至超出通常可以接受的±10%偏差范围。并且随着样品数越多,操作人员容易造成眼疲劳,无法继续进行有效并准确地计数。


细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

                                                                        手工显微镜法细胞计数的照片和计算方法



因此,插板式半自动细胞计数仪应运而生,它省去了操作人员肉眼观察和统计死活细胞数的步骤,但剩下几个步骤还需要手动完成,包括吸液加样、台盼蓝染色和上样分析(有时还要手动对焦),测试结束后需更换新的细胞计数板做下一批样品。

细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

半自动细胞计数仪的三种计数板手动加样照片

相比全自动细胞计数仪,半自动细胞计数仪存在以下问题导致计数结果重复性和准确性要差:


  1. 细胞样品和台盼蓝的体积需要移液枪手动定量,而且混匀也是手动来完成,因此不可避免地产生人为操作误差。

  2. 从摇瓶培养的几十毫升或生物反应器几十到上百升的细胞样品中,吸取20-30uL体积的样品进行检测,由于取样量少,容易引起取样代表性差,结果不准确的问题。

  3. 仪器一般只拍1-3张照片,分析统计的细胞数量相对少,结果的代表性相对较差。

同时,染色后的细胞样品通过移液枪加到计数板上,有时会操作不当产生气泡,特别是细胞培养液中含有较多易产生气泡的蛋白,这种问题更容易发生。另外,废弃的细胞计数板还会产生二次固体污染,这些问题目前都没有好的解决方法。


那有没可能细胞的混悬和染色,以及细胞的计数和分析过程全部实现自动化,同时不用手动更换新的细胞计数板而自动做下一个样品呢?答案是使用全自动细胞计数分析仪。

PART 02


如何快速鉴别

全自动和半自动细胞计数仪?


结合细胞计数和活率分析的检测过程,除了要放入待检测的样品外,全自动细胞计数仪可以让仪器自动完成样品的混悬、台盼蓝染色、细胞拍照和识别、测试结果的分析统计和显示。

细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇


相比半自动细胞计数仪,全自动细胞计数仪有以下一些特点可供大家快速鉴别。

1. 自动混悬和台盼蓝染色


全自动细胞计数仪的一个显著特点是能够自动完成细胞的吹打混悬和台盼蓝染色。

细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

要拥有这个特点,仪器必须具备下面两个功能。

首先,仪器内部要有步进马达,准确控制细胞样品和台盼蓝等体积混合。

然后,仪器还要可以自动混匀染色,能将细胞样品和台盼蓝进行有效地染色处理。

而这两步操作,对于半自动细胞计数仪而言,还只能通过手动操作来完成。



2.自动管路清洗


全自动细胞计数仪内部有一个流通池,可用于流过的细胞拍照成像,所以就不需要细胞计数板这个耗材。当样品检测结束后,仪器需要自动对流通池进行清洗,并在清洗结束后将管路内液体切换到对细胞友好的磷酸缓冲液,等待下一个样品的检测。

所以,除了对细胞拍照的光路系统和用于数据控制的电子系统外,相比半自动细胞计数仪,全自动细胞计数仪还有一个清洗管路的液路系统,并通过八通阀的切换完成细胞的染色和管路清洗。因此,一般大家看到的全自动细胞计数仪体积会相对大一些。



细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

全自动细胞计数仪检测原理示意图和结构组成

3. 高通量和不间断检测


全自动细胞计数仪的另一个特点是高通量和不间断检测。待测样品可以先放到转盘或96孔板上,根据软件中设置好的分析条件,仪器会自动按要求分别对这些细胞样品完成计数和活率分析。

细胞计数仪知识分享系列 I 鉴定识别篇

Vi-CELL BLU细胞计数仪的两种上样模块

以贝克曼库尔特生命科学Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪为例,使用转盘一次可以放21个样品,而使用孔板最多可以放96个样品进行分析测试。若使用24位转盘,在检测过程中还可以实现不间断上样测试,即样品测试过程中,还可以放入新的待测样品。所以,在操作便捷性上,全自动细胞计数仪也是优于半自动细胞计数仪。

总之,全自动细胞计数仪在细胞样品混悬和染色方面避免了人为操作带来的误差,同时仪器能自动清洁管路和过夜清洗,而且可以高通量上样和不间断测试。因此,不管是细胞计数的重复性和准确性,还是仪器操作的便捷性上,全自动细胞计数仪都比半自动插板式细胞计数仪更有优势。

希望大家可以通过此文介绍的以上这些特点,在面对琳琅满目的细胞计数仪时,能够快速有效地鉴别出细胞计数仪是“真"全自动还是“假"全自动。

除了仪器测试结果的重复性和准确性,对于生物制药的质量控制和生产部门,仪器软件的法规符合度也是一个很重要的点。所以,下一期的细胞计数仪知识分享,我们将为您提供法规符合度方面的内容介绍。



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