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开学新搭子已就位!小贝带你逆袭成‘离心大师’~

点击次数:103 更新时间:2025-08-22
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第一期


离心原理与常用术语


一句话简述——离心是什么?


离心技术是一种利用高速旋转所产生的离心力场,依据不同组分沉降系数的差异,实现样品分离、分析、浓缩与纯化的物理方法,广泛应用于科研、医疗及工业领域。

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离心常用术语


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沉降系数是生物大分子极其重要的物理参数,通过它可以了解生物大分子的相对分子量、分子形状和水化程度等(图1)。早在1940年,Svedberg和Pedersen发展了用分析超速离心技术来测量生物大分子的沉降系数和分子量,直至现在,分析超速离心方法仍然是测定生物大分子沉降系数的金标准。


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图1. 重力作用下混合颗粒的沉降:颗粒沉降的速度依赖于颗粒的大小,大颗粒则先沉降到底部,而小颗粒则停留在容器的上部


Svedberg在实验过程中定义了沉降系数(S,Svedberg):S就是单位离心加速度的作用下颗粒移动的速度。用以下公式表示:


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由于大部分的生物大分子的沉降系数都在10-11-10-13s(秒)范围内,故定义了沉降系数的单位S,1 S=1x10-13 s(秒)。S值经常被用来描述生物大分子(如核酸、蛋白)和一些大分子复合物(如核糖体、核糖体亚基),参见图2。蛋白的沉降系数在1-20 S之间,核酸的沉降系数在5-100 S之间,亚细胞器的沉降系数则更大,基本在几百S到几千S之间。


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图2. 生物颗粒的沉降系数

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尽管有些生物颗粒可以在重力场(1×g)作用下实现分离,如人血细胞,将处理过的血细胞置于桌上1-2小时,由于不同细胞的大小不一样,白细胞和红细胞能自动分层。但若需分离更小的生物颗粒,远大于重力的力则是必须的,这可以通过沿轴旋转装有悬浮颗粒的离心管来实现。颗粒在放射状的离心力下从轴心向外运动,使离心管旋转的机器就是离心机,而装载了离心管并带动离心管沿轴旋转的即是转子。


不管是细胞还是生物大分子受到离心力都可以用以下公式计算:


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但是通常情况下,旋转的转子受到的放射状的力都是由相对离心力 (RCF:Relative centrifugation force) 来衡量的。而所谓的相对离心力即是离心力与重力之比,用以下公式表示:


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结合公式 (2) 和公式 (3) ,可得到同一转子的转速(RPM)与相对离心力(RCF)之间的关系:


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由于转子的形状及设计,离心管中从管顶至管底各点到旋转中心的距离是不同的,为了计算相对离心力的数值可用平均相对离心力来表示,即同一离心转子部和底部所受离心力的平均值。科技文献中离心力的数据通常是指其平均值(RCFav),即离心管中点的离心力


而各厂家在标注离心机和转子等的最大相对离心力(RCF)时,一般都是用的最高转速下、最大半径处(Rmax)的相对离心力。请注意区分这个参数与平均离心力(RCFav)的差异。

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转子的k值,又称k因子或k系数,用以衡量转子的沉淀效率


所有的离心机厂家在转子出厂时都计算了制备型转子的k值,转子k值通过在转子运行至最高转速、离心管装满样品时计算得到的,其计算公式如下:


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由于将公式 (5) 代入公式 (6) ,可得到以下转子k值的计算公式:


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由上得出转子k值是与转子的最高转速转子的形状有关。最高转速完全一样的转子,离心管与轴的角度越小,也就是rmax/rmin越小,k值就越小。


所以制备型超速离心机的四类转子的k值如下:水平转子k值>定角转子k值>近垂直转子k值>垂直转子k值(图3)。


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图3. 四类转子k值比较,水平转子k值>定角转子k值>近垂直转子k值>垂直转子k值


如果在离心时,转子没有运行到最高转速,那么rpm就不能使用最高转速的k值,必须将转子实际运行转速代入公式 (7) 来计算实际的k值。


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已知某转子k值和颗粒的沉降系数,可以计算出用该转子分离颗粒时所需要的时间。公式如下:


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由公式 (9) 可以看出,对于沉淀同一颗粒,转子k值越小,颗粒沉淀所需要的时间就越短,也就是离心效率越高;反之,转子k值越大,颗粒沉淀所需要的时间就越长,转子的离心效率越低。


如果已知一个转子k值和沉淀所需要的时间,如果用另一个转子来沉淀同样的颗粒,可以用以下公式来计算需要沉淀的时间:


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如果该转子不是在最高转速下运行,或者样品没有装满,又或者换用了其他更小的离心管(例如g-MAX管等),相应k值都会发生改变,相应离心所需的时间也需要重新计算。


我们对三台最大转速并不相同的转子进行了实验对比,发现相对离心力最高的转子并不代表离心时间更短,K因子最小的转子则会表现出更高的离心效率及更少的时间(图4-5)。因此,在选择转子型号时,不能单看转速 (RPM) 、相对离心力 (RCF) 等参数,而是应该参考能反映出最真实情况的k值。因为K因子是衡量转子离心效率的统一标准,其与离心时间成完全正比,即K因子越小所需离心时间越短。


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图4. 对三台最大转速并不相同的转子进行了实验对比,发现K因子最小的转子则会表现出更高的离心效率及更少的时间


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图5. 三台不同转速的转子离心40 L样品所需的时间对比

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