5小时搞定AAV空壳/实心分离!「OptiMATE梯度大师」放大攻略来了!

AAV基因疗法火不火,关键就看「实心衣壳」纯不纯。CsCl密度梯度超离(DGUC)仍是金标准,但16-20 h的离心时间让人头大。贝克曼库尔特生命科学推出OptiMATE「预制梯度」方案,把4×39 mL(Type 70Ti)跑样时间压到5小时。
今天我们把同样的速度搬进了更大容量转子
Type 50.2Ti(468 mL)
和Type 45Ti(564 mL)
放大不翻车!
实验一:预制梯度vs自形成梯度
OptiMATE自动分液灌装线性CsCl梯度(1.15-1.55 g/mL)→离心4 h;
手工灌均一液(1.35 g/mL)→20 h自形成梯度。
实验二:AAV样本加载
39 mL管:2×1013 vg AAV9;
94 mL管:4×101? vg AAV9。
离心参数:

实验结果对比:
梯度曲线几乎重叠,预形成4 h=自形成20 h分辨率。
AAV纯化条带实拍:AAV空壳/实心条带锐利,5 h即可手动侧抽回收(图2)
分析型超离验证实心AAV纯度≈90%,时间节省75%
通过「预形成梯度+大容量转子」把AAV空壳纯化从2天压到半天,放大不掉分辨率,OptiMATE梯度大师为基因治疗CMC提速!
Type 45Ti:一次8×94 mL=752 mL,比传统70Ti多出80%通量;
Type 50.2Ti:12×39 mL=468 mL,管数多50%,抽提步骤更少;
全程封闭灌梯度→减少人为误差,GMP场景友好。


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