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超速离心有哪几种方法?如何选择?

点击次数:492 发布时间:2021-08-06
离心机是借离心力分离液相非均一体系的设备。根据物质的沉降系数、质量、密度等的不同,应用强大的离心力使物质分离、浓缩和提纯的方法称为离心。一般说,离心机转速在30000r/min以上的称为超速离心。离心技术,特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段。

根据不同的实验目的要选择合适的离心方法:

(1)差速离心:差速离心的分辨率不高,沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于颗粒或密度差别较大的组分的分离,或其他分离手段之前的粗制品提取。比如:在碳纳米管分散中将单根的碳纳米管与成束的碳纳米管,以及催化剂颗粒、无定性碳杂质等进行分离。在进行电泳分离或密度梯度离心前现将原始溶液进行离心除去大块杂质。

(2)速率区带法:速率区带离心法适于分离颗粒大小不同而密度相近或相同的组分,如DNA与RNA混合物、溶酶体及过氧化物酶体及密度相近而大小不同的纳米颗粒等。

(3)等密度离心法:不同颗粒存在浮力密度差时,在离心力场作用下,在密度梯度介质中,颗粒或向下沉降,或向上浮起,一直移动到与它们各自的密度恰好相等的位置上形成区带,从而使不同浮力密度的物质得到分离。等密度离心的介质有:氯化铯、硫酸铯、溴化铯、三碘苯衍生物等。等密度离心的操作:介质溶液与样品液混合均匀,足够时间离心。介质梯度不需预先制备,离心时把密度均一的介质液和样品混合后装入离心管,通过离心形成梯度,让颗粒在梯度中进行再分配。常用来分离提取核酸、亚细胞器和质粒。

 

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