流式细胞术在感染性疾病中的应用

感染性疾病是指由各种生物性病原体（如细菌、病毒、真菌、寄生虫等）侵害或寄生人体所引发的疾病。这类疾病具有传染性和流行性，其发生和传播与病原体的致病性、宿主的易感性以及环境因素密切相关。

近百年来全球五次大规模传染病的流行均为呼吸道相关病毒，包括甲型流感病毒（SARS-CoV-2）。病毒感染呼吸道后可诱导固有和适应性免疫应答，触发抗病毒免疫和级联炎症反应。理想有效的免疫应答可以中和病毒、抑制病毒入侵、及时清除病毒感染的靶细胞、维持炎症与损伤修复之间适当的平衡，最终得以保证机体的稳态。反之，重症感染和过度的免疫应答可诱导病理损伤，诸如细胞因子风暴，靶器官炎症失调等可引起多器官组织损伤和功能衰竭。

流式细胞术可用于分析免疫细胞的亚群分布、活化状态和功能。通过检测免疫细胞表面的标志物，可以评估机体的免疫功能，为感染性疾病的治疗提供指导。如在艾滋病诊疗中，CD4+T淋巴细胞计数是艾滋病分期的核心指标，流式细胞术可动态监测CD4+T细胞水平，评估抗病毒治疗效果及免疫重建情况。再进一步的监测中，流式细胞术可区分初始T细胞、记忆T细胞等亚群，揭示免疫恢复的微观机制，为免疫功能重建不全患者的监测提供依据。

TBNK细胞是外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞亚群的简称，这些细胞是机体免疫功能的重要指标之一，主要用于免疫系统疾病及免疫相关疾病诊断和治疗的临床监测。自身免疫疾病发病、进展以及治疗过程中常伴随着TBNK淋巴细胞数量、比例和功能上的变化。TBNK淋巴细胞亚群检测能反映机体当前的免疫状态，辅助疾病诊断，同时对分析疾病的发病机制、B细胞清除疗效评估、副作用及预后监测提供参考依据。

T淋巴细胞起源于骨髓，然后转移到胸腺中发育成熟，是机体免疫细胞中数目最多、功能最复杂的一类细胞。

流式细胞分析仪FCM根据淋巴细胞表面标志的不同来检测T淋巴细胞亚群：初始T细胞（CD45RA+CD27+）、中央记忆T细胞（CD45RA-CD27+）、效应记忆T细胞（CD45RA-CD27-）、终末分化效应记忆T细胞（CD45RA+CD27-）、活化亚群（CD38+）、衰老耗竭亚群（PD1,CD57,CD28）等。通过T淋巴细胞亚群的监测可以了解在不同疾病状态下患者的细胞免疫功能状态，已经广泛在肿瘤、自身免疫、感染性疾病中,辅助临床诊断、帮助了解发病机理、判断预后和指导临床治疗。若外周血中T细胞总数或不同T细胞亚群的绝对数和比值发生改变,可视为免疫异常。

CD64是可以识别免疫球蛋白的IgGFc片段I型受体（FcγR1），对IgG单体具有高亲和力，介导体液免疫和细胞免疫，对感染性疾病具有早期诊断价值。正常情况下，中性粒细胞表面几乎不表达CD64。当机体患感染性疾病后4-6小时中性粒细胞表面CD64表达迅速升高，CD64表达可增强中性粒细胞功能，包括细胞吞噬功能。CD64可通过抗体依赖性细胞毒作用、细胞吞噬作用和免疫复合物清除作用实现对病原微生物的清除，可做为感染性疾病良好的诊断依据。

nCD64指数以1.19为临界值，判断是否为细菌感染；≤1.19，判断为非细菌感染，＞1.19，判断为细菌感染。与革兰阳性细菌相比，革兰染色阴性细胞感染时中性粒细胞的CD64表达更高⁶。脓毒症发生发展过程中，存在一定的免疫抑制现象，免疫抑制现象与炎症的严重程度有一定的相关性。

*由于方案、溶血素、仪器等不同都会造成荧光强度差异，因此不同实验室在建立此方案时建议重新验证参考范围，以达到精确的判读效果。

单核细胞HLA-DR（mHLA-DR）的检测可直接反映该类细胞的抗原呈递功能，mHLA-DR水平可反映感染性疾病尤其是急重症患者机体免疫抑制的状态，是天然免疫监测的首要指标；外周血单核细胞表面HLADR/CD14的表达率与感染及疾病的严重程度密切相关，可作为判断急重症疾病严重程度和预后的免疫指标。

研究发现，当表达<30%时，存活率降低，认为<30%的表达是脓毒症免疫抑制的标准。感染者早期单核细胞HLA-DR表达降低，并证明其与严重程度评分、继发感染及死亡相关。

单核细胞根据CD16/CD14进一步分为经典单核细胞（CD14++CD16-，Mo1），主要发挥吞噬功能、中间单核细胞（CD14++CD16+，Mo2）其主要分泌细胞因子，激活淋巴细胞免疫功能、非经典单核细胞（CD14+CD16++，Mo3），其抗原提呈功能增强。从经典到中间型再到非经典单核细胞存在一种发展关系，即在感染过程中或使用巨噬细胞集落刺激因子 (M-CSF) 治疗时，首先是中间单核细胞增加，然后是非经典CD14+CD16++单核细胞增加。

CD14++CD16+中间型和CD14+CD16++非经典单核细胞在哮喘、动脉粥样硬化、心血管疾病、类风湿性关节炎、癌症等炎症性疾病中发现增加。

流式细胞术作为一项先进的细胞分析技术，为感染性疾病的临床诊疗提供了快速、准确、全面的免疫学检测手段：