【BLU视野】对不同种类的细胞计数分析注意事项

离心和重悬是细胞接种前或用于其他实验前，对细胞进行洗涤和浓缩的常规方法。CHO细胞通常被认为具有较强的耐受性，但它们对生长条件有非常特殊的要求，需要专用培养基才能维持最佳的细胞状态。

在以下实验中，先将细胞以1000×g的离心力离心5分钟（此为相对温和的离心条件），随后将其重悬于培养基或缓冲液中，以评估细胞制备过程（若存在影响）对细胞状态的作用。

结果表明，在推荐培养基中进行离心和重悬处理，对CHO细胞无显著影响。然而，在PBS缓冲液中重悬会导致细胞活率急剧下降，且细胞平均直径显著减小。此外，细胞浓度也出现轻微降低，这可能是重悬过程中细胞损失所致。若在PBS中再次进行离心和重悬处理，会对细胞活率和细胞大小产生进一步的负面影响。

EL4细胞通常被认为较为脆弱，即使在理想条件下，其生长速度也较慢，存活率低于70%。本实验制备EL4细胞并将其加样到96孔板中。以标准的Mammalian细胞类型为基础，通过设置不同的染色吹打次数，从而建立该细胞的Cell Type。

本研究的目的是评估：对于已知易受涡旋混合和离心作用损伤的细胞类型，增加吹打强度（若存在影响）会产生何种影响。

尽管所有样品的细胞计数、浓度和直径数值均无统计学差异，但随着染色吹打次数的增加，活细胞计数显著下降，细胞存活率也随之降低。这表明，减少染色吹打次数的Cell Type可能更适合此类细胞，过度吹打并非理想条件，应尽量避免。

即使在理想条件下培养，SF9细胞也难以达到较高密度，且其存活率通常低于60%。因此，96孔板检测过程中仪器所需的较长操作时间，可能会对细胞培养产生不利影响。为评估该影响，本实验采用标准Insect 细胞类型检测SF9细胞。

结果显示，在3小时的检测过程中，未观察到细胞存活率受到影响。同时，也未发现细胞直径出现显著变化（细胞死亡或肿胀时可能会出现直径变化）。由此可见，尽管该细胞系存活率较低，但其耐受性较强，在细胞培养箱外长时间放置也不会产生不良影响。

对细胞施加压力从而将HeLa细胞培养至高度汇合状态。随后收集细胞并制成细胞悬液，再将其加到96孔板中，采用标准Mammalian细胞类型检测收集分析结果。检测时按列分析收集96孔板中样品的检测结果，以确保同一行中各样品的检测时间间隔一致。

结果发现，96孔板中排在后面检测的细胞样品，其细胞浓度略高。进一步研究表明，随着时间推移，细胞的平均直径在增大。

观察所获取的图像可见，出现肿胀或起泡现象的细胞数量不断增加，同时还存在大量非细胞囊泡。尽管后者（非细胞囊泡）通常不影响细胞计数，但根据细胞类型的参数设置，它们仍有可能被计为小细胞。在96孔板检测的3小时过程中，细胞肿胀效应导致细胞平均直径增加了近10%，且可能使部分直径略低于下限阈值的小细胞被纳入细胞计数范围。