双擎驱动 各有神通 | CytoFLEX mosaic传统/光谱双模式实战对比
CytoFLEX mosaic光谱流式分析仪自上市以来最亮眼的设计之一就是：同时兼容传统流式与光谱流式两套检测系统。可在几分钟内轻松切换检测模式，真正实现“一机两用”，全面覆盖基础科研与临床科研多场景检测需求。
以下分享的研究就是基于CytoFLEX LX流式细胞仪及CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块，对DURAClone IM T细胞Panel1在传统模式与光谱模式下的检测效果进行了系统对比。结果表明，两种方法均能稳定识别T细胞亚群，而光谱流式细胞术在灵敏度方面表现更优，特别适用于弱表达标志物及低丰度细胞群体的检测。
方法介绍
采集EDTA抗凝外周血，经Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离PBMCs，并于含FBS和DMSO的冻存液中液氮保存2。复苏后细胞经活力染料染色，并使用10色DURAClone IM T细胞Panel进行标记。分别在CytoFLEX LX和CytoFLEX mosaic系统上采集数据，各模式分析不少于40万个淋巴细胞。数据经CytExpert（传统模式）和CytExpert for Spectral（光谱模式）软件处理与分析。
图1：(A) 使用传统流式细胞术（CytoFLEX LX流式细胞仪）进行T细胞分析的连续设门策略点图。每个步骤都标明了阳性群体的百分比，包括单细胞、活力细胞、淋巴细胞、CD3+CD45+、CD4+、CD8+以及通过CD45RA vs. CCR7定义的T细胞亚群。还显示了对CD27/CD28和PD-1/CD57表达的进一步分析。(B) 使用CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块配合CytoFLEX LX流式细胞仪生成的等效点图，应用相同的设门策略并显示相应的群体百分比。T细胞亚群包括：i. 初始T细胞 (N) ii. 中央记忆T细胞 (CM) iii. 效应记忆T细胞 (EM)
表1：光谱流式vs.传统流式细胞术在T细胞亚群分析中的性能比较
图2：选定标志物（CD3 APC-A750、PD-1–PC5.5和CD45-KrO）在传统（CytoFLEX LX流式细胞仪）和光谱（CytoFLEX mosaic光谱检测模块）模式下的信噪比比较。显示了每个标志物的信噪比，突出了光谱模式下灵敏度和分辨率的提高——最明显的是CD3 APC-A750 (240.59 vs. 116.95) 和CD45-KrO (134.46 vs. 22.83)
结论
传统和光谱流式细胞术模式在识别主要细胞群体方面表现出相当高的一致性，细胞设门结果几乎相同。传统流式细胞术对于常规免疫表型分析仍然有效，但光谱流式细胞术为更复杂的分析提供了显著优势，例如，光谱流式细胞术为某些标志物（如CD3–APC-A750和CD45–KrO）提供了更优的信噪比，其解析重叠光谱和检测稀有或弱表达群体的能力，使其成为传统方法的有价值补充。
CytoFLEX平台的模块化设计实现了传统模式和光谱模式的无缝集成，提供了灵活性以适应广泛的实验需求。
参考文献：
1.B53328, DURAClone IM T-cell Subsets Tube, 25 Tests, RUO
2.De Biasi, S., Lo Tartaro, D., Neroni, A. et al. Immunosenescence and vaccine efficacy revealed by immunometabolic analysis of SARS-CoV-2-specific cells in multiple sclerosis patients. Nat Commun 15, 2752 (2024)
